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>更新时间:2009-08-28 13:05:25 |
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简 介 |
【复习目标】 本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取,了解DNA的物理化学性质, 理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。 【复习重点与难点】 复习重点:DNA的粗提取和鉴定方法。 复习难点:DNA的粗提取和鉴定方法。 【知识回顾】 一、实验原理 提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言,就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。 1.DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的。 此外,DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理, 可以将DNA与蛋白质进一步的分离。 2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质,但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温,而DNA在80oC以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。 3.DNA的鉴定 在沸水浴条件下,DNA遇二苯胺会被染成蓝色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 二、实验设计 1.实验材料的选取 凡是含有DNA的生物材料都可以考虑,但是使用DNA含量相对较高的生物组织,成功 的可能性更大。 2.破碎细胞,获取含DNA的滤液 动物细胞的破碎比较容易,以鸡血细胞为例,在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞,需要先用洗涤剂溶解细胞膜。例如,提取洋葱的DNA时,在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐,进行充分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液。
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